Terugkijkend en ik kijk ernaar uit: bijdragen van elektronenmicroscopie

Terugkijkend en ik kijk ernaar uit: bijdragen van elektronenmicroscopie

Terugkijkend en ik kijk ernaar uit: bijdragen van elektronenmicroscopie om de structurele  cel  biologie  van gameten en bevruchting

Zoogdiergameten – het sperma en het ei – vertegenwoordigen tegenovergestelde uitersten van cellulaire organisatie en schaal. Het bestuderen van de ultrastructuur van gameten is cruciaal om hun interacties te begrijpen en hoe ze te manipuleren om hun vereniging aan te moedigen of te voorkomen. Hier onderzoeken we de prominente elektronenmicroscopie (EM) -technieken, met de nadruk op overwegingen om ze toe te passen om gameten van zoogdieren te bestuderen.

We bekijken hoe conventionele EM aanzienlijk inzicht heeft gegeven in de ultrastructuur van gameten, maar ook hoe de harde monstervoorbereidingsmethoden die nodig zijn, begrip op een echt moleculair niveau uitsluiten . We presenteren recente ontwikkelingen op het gebied van cryo-elektronentomografie die de mogelijkheid bieden om cellen in een bijna natuurlijke staat en met ongekende detailniveaus af te beelden.

Nieuwe en opkomende cellulaire EM-technieken staan ​​klaar om de verkenning van fundamentele vragen in de reproductie van zoogdieren nieuw leven in te blazen, met name fenomenen die complexe hermodellering van membranen en eiwitreorganisatie met zich meebrengen. Deze methoden zullen ook nieuwe onderzoekslijnen mogelijk maken naar problemen van praktisch belang, zoals het onderzoeken van onverklaarbare oorzaken van menselijke onvruchtbaarheid en het verbeteren van geassisteerde voortplantingstechnologieën voor het behoud van biodiversiteit.

Transcriptoom- en proteoomanalyses van Clear  Cell  Foci (CCF) in de Human Non-levercirrose onderscheidt verschillende differentieel tot expressie genen en eiwitten met functies in Cancer  Cell  Biology  en glycogeen metabolisme

Clear cell foci (CCF) van de lever worden beschouwd als pre-neoplastische laesies van hepatocellulaire adenomen en carcinomen. Ze worden gekenmerkt door een overbelasting van glycogeen en activering van AKT (v-akt murine thymoma virale oncogen homoloog)/mTOR (zoogdierdoelwit van rapamycine)-signalering. Hier rapporteren we het transcriptoom en het proteoom van CCF dat is geëxtraheerd uit menselijke leverbiopten door middel van laseropname-microdissectie.

We vonden 14 genen en 22 eiwitten die differentieel tot expressie werden gebracht in CCF en de meeste hiervan werden op lagere niveaus tot expressie gebracht in CCF. Met behulp van immunohistochemie werden de gereduceerde expressies van STBD1 (zetmeelbindend domeinbevattend eiwit 1), USP28 (ubiquitine-specifiek peptidase 28), monad/WDR92 (WD repeat-domein 92), CYB5B (Cytochrome b5 type B) en HSPE1 (10 kDa heat shock-eiwit, mitochondriaal) werden gevalideerd in CCF in onafhankelijke monsters.

Knock-out van  Stbd1 , het gen dat codeert voor zetmeelbindend domein-bevattend eiwit 1, bij muizen had geen significant effect op leverglycogeenniveaus, wat aangeeft dat aanvullende factoren nodig zijn voor glycogeenoverbelasting bij CCF Usp28-  knockout-muizen vertoonden geen veranderingen in glycogeenopslag in door diethylnitrosamine geïnduceerd levercarcinoom, wat aantoont dat CCF verschilt van dit type kankermodel, ondanks de verminderde USP28-expressie.

Bovendien geven onze gegevens aan dat verminderde USP28-expressie een nieuwe factor is die bijdraagt ​​aan het pre- neoplastische karakter van CCF. Samenvattend identificeert ons werk verschillende nieuwe en onverwachte kandidaten die differentieel tot expressie worden gebracht in CCF en die functies hebben in glycogeenmetabolisme en tumorigenese.

Collectieve cel migratie van fibroblasten wordt beïnvloed door horizontale trilling van de cellculture schotel

Het reguleren van de collectieve migratie van cellen is een essentiële moeilijkheid in bio-engineering. Het versterken of onderdrukken van celmigratie en het beheersen van het migratieverloop is gunstig voor tal van fysiologische verschijnselen die verwant zijn aan wondtherapie.

  • Er zijn een aantal strategieën voor migratieregulatie beschreven die voornamelijk gebaseerd zijn op totaal verschillende mechanische stimuli . Terwijl trillingsstimuli, vergelijkbaar met geluidsgolven, veelbelovend zijn voor het reguleren van migratie, is de impact van het trillingsverloop op collectieve celmigratie niet diepgaand bestudeerd.
  • Vervolgens hebben we een trilsysteem gefabriceerd dat horizontale trillingen kan toepassen op een celtraditieschotel. Hier evalueerden we de impact van het vibratieverloop op de collectieve migratie van fibroblasten in een wondpop bestaande uit twee traditionele gebieden gescheiden door een nis.
  • De resultaten bevestigden dat het trillingsverloop de celmigratieafstand beïnvloedt: trillingen orthogonaal ten opzichte van het gat vergroten de collectieve celmigratieafstand, terwijl trillingen parallel aan het gat deze onderdrukt. De resultaten bevestigden bovendien dat situaties die resulteren in een grotere migratieafstand ook verband houden met een verhoogd glucoseverbruik. Bovendien veranderen in situaties waarin celmigratie wordt verkocht, de celkernen in langwerpig en georiënteerd loodrecht op het gat. In tegenstelling tot situaties die de migratieafstand verkleinen , zijn celkernen georiënteerd op de baan evenwijdig aan het gat.

 

 

microschotel
microschotel

Een nieuw driestappenprotocol om extracellulaire blaasjes te isoleren uit plasma of celkweekmedium met elke overmatige opbrengst en zuiverheid

Extracellulaire blaasjes (EV) zijn membraan-ingekapselde nanodeeltjes die kunnen werken in intercellulaire communicatie, en hun aanwezigheid in biovloeistoffen zal indicatief zijn voor (patho)fysiologische situaties. Onderzoek dat gericht is op het oplossen van functionaliteiten van EV of het vinden van EV-geassocieerde biomarkers voor ziekte in vloeibare biopsieën, wordt belemmerd door beperkingen van de huidige protocollen om EV te isoleren van biovloeistoffen of celtraditiemedium.

EV isolatie verfijnd door> 10 5 voudige numerieke extra van verschillende vormen van deeltjes, tezamen met lipoproteïnen en eiwitcomplexen. Naast hardnekkige verontreinigingen, kunnen momenteel bestaande EV-isolatiestrategieën het gevolg zijn van inefficiënte EV-restauratie, bias voor EV-subtypen, interferentie met de integriteit van EV-membranen en gebrek aan EV-prestaties.

Bij dit onderzoek hebben we een nieuwe niet-selectieve techniek in drie stappen vastgesteld om EV te isoleren van bloed- of celtraditiemedia met elke buitensporige opbrengst en zuiverheid, wat leidt tot 71% herstel en bijna volledige eliminatie van niet-verwante (lipo)eiwitten. Dit EV-isolatieproces is onpartijdig van slecht gedefinieerde zakelijke kits en vereist, afgezien van een ultracentrifuge, geen gespecialiseerde dure uitrusting.

Vloeistofchromatografische profilering van monosacharideconcentraties in gecompliceerde celcultuurmedia en fermentatiebouillons

Er is een op stabiele sectie-extractie, vloeistofchromatografie en fluorescentie (SPE-RPLC-FL) gebaseerd protocol ontwikkeld voor de wilskracht van vrije monosachariden in extreem gecompliceerde ongekookte materialen, poeders en geformuleerde fermentatiegrondstoffen en bouillons .

  • Monosachariden in patroonextracten zijn voor de kolom gederivatiseerd met antranilzuur en de derivaten zijn gescheiden met behulp van reversed-phase LC met fluorescentiedetectie. Gebruikmakend van een 2,1 mm × 50 mm 1.Eight µm Zorbax Eclipse XDB-C18-kolom, een bewegingslading van 0,4 ml min-1 en een acetonitrilgradiënt in een natriumacetaatbuffer (pH 4,3; 50 mmol L-1) de basislijn beslissing van glucosamine , mannosamine, galactosamine.
  • galactose, mannose, glucose, ribose, xylose, fucose en siaalzuur werden binnen 20 minuten bereikt. Pre-kolom derivatisering betrof het combineren van een 30 mg ml-1 resolutie van antranilzuur in een 1 : 1 verhouding met een waterige alledaagse stof voorafgaand aan injectie.
  • Gebruikelijke standaarden voor analytische efficiëntie zijn gebruikt voor analysefuncties, waarbij de strategie is ontdekt om LOD’s van slechts 10 fmol te vertonen en lineair en exact te zijn (% RSD < 2,2% (n = 7). De tactiek werd gebruikt voor de evaluatie van een verscheidenheid aan extreem gecompliceerde biofarmaceutische productiemonsters, samen met gistolaatpoeders , chemisch omlijnde media en in-process fermentatiebouillonmonsters.
  • Patroonvoorbereiding omvatte het passeren van een waterig patroon via een C18-extractiepatroon met stabiele sectie om hydrofobe peptiden en voedingsvitaminen te lokken, met herstel van alle suikers van meer dan 90%.
  • Ten slotte werd een alledaagse statistische evaluatie uitgevoerd op monsters van totaal verschillende tonnen met als doel de variabiliteit van partij tot partij te schatten.

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *